Cекреты благополучия женщины

Подпишитесь на лентуПодпишитесь на лентуTwitterTwitterВКонтактеВКонтактеВидеоВидеоFacebookFacebook

Электрофорез с эуфиллином на поясницу взрослому


Все об электрофорезе с эуфиллином

Электрофорез (гальванофорез) – физиотерапевтическая процедура, при которой применяют постоянные электрические стимулы для достижения лечебного эффекта. Эуфиллин – спазмолитик, относится к ксантинам, широко используемый в медицине в виде таблеток и раствора уже на протяжении многих лет. Препарат так же не потерял своей ценности в применении для процедуры электрофореза при различных заболеваниях, как взрослых, так и детей. Он имеет много необходимых положительных эффектов: снимает спазм с мышц и сосудов, улучшает кровообращение и отток лимфы, ускоряет обмен веществ, уменьшает боль, воспаление и отёк, активирует иммунитет, расслабляет нервную систему.

Содержание статьи

Показания для электрофореза с эуфиллином

Для процедуры эуфиллин используют в растворе. Если говорить о плюсах именно такого способа доставки лекарства:

  • медикамент доставляется до желаемого места в активном состоянии;
  • доставка целенаправленна в конкретный очаг болезни, что уменьшает ненужное действие на весь организм;
  • вещество при таком способе транспортировки имеет свойство накапливаться и увеличивать тем самым длительность своего эффекта.

Электрофорез с эуфиллином показан в таких случаях:

  1. Бронхиальная астма.
  2. Нарушение мышечного тонуса (спазмы мышц).
  3. Гипертоническая болезнь.
  4. Заболевания толстого кишечника.
  5. Заболевания позвоночника: остеоартроз, остеохондроз, грыжи Шморля.
  6. Нарушение кровообращения в почках и головном мозге.
  7. Псориаз.
  8. Склеродермия.
  9. Болезни органов малого таза.
  10. Лимфаденит.
  11. Хроническое обструктивное заболевание легких.
  12. Трахеит.
  13. Фурункулёз.
  14. Пролежни.
  15. Некоторые заболевания нервной системы.

Показания для применения у грудничков

Так же применяется электрофорез с эуфиллином для грудничков. Существует ошибочное мнение, что это опасно для детей данного возраста. Но это далеко не так. Наоборот, процедура несёт только положительный эффект. Поэтому, её назначают младенцам начиная с первого месяца жизни при таких заболеваниях:

  1. Ожоги кожных покровов.
  2. Врождённые пороки сердца.
  3. Тонзиллит.
  4. Синусит, гайморит.
  5. Отит.
  6. Цистит.
  7. Пиелонефрит.
  8. Детский церебральный паралич.
  9. Гепатит.
  10. Колит.
  11. Энтероколит.
  12. Стоматит.
  13. Цистит.
  14. Диатез.
  15. Бронхит.
  16. Пневмония.
  17. Дисплазии и подвывихи суставов.
  18. Повышенный и пониженный тонус мышц.
  19. Кривошея.
  20. Родовые травмы.
  21. Гидроцефалия.
  22. Лимфаденит.
  23. Замедление развития.

Техника выполнения процедуры

Процедура довольно простая. Проводится медработником в физиотерапевтическом кабинете. Инструкция по применению эуфиллина для электрофореза составляется доктором. В основном берут лекарство в ампулах с концентрацией 2,4 процента. Кроме аппарата нужны подходящие электроды и салфетки. Последнее перед использованием смачивают необходимым раствором, заранее приготовленным. Затем помещают на нужные участки тела и погружают туда электроды. Первая прокладка к полюсу с плюсом, вторая с минусом. Пациента следует укрыть на период процедуры. На протяжении всего сеанса контролируют силу тока (её увеличивают постепенно) и время действия. Необходимо следить за самочувствием пациента. В норме он может ощущать незначительное покалывание в местах наложения электродов. При возникновении боли или дискомфорта процедуру следует прекратить и сообщить об этом лечащему врачу.

В среднем курс терапии длится 10-14 дней. Проводиться каждый день или через день. Длительность – 20 минут для взрослых и 10 для детей.

Есть и другие способы доставить эуфиллин при электрофорезе к нужному участку тела:

  • ванночковый – раствор наливают в емкость с вмонтированными электродами и опускают туда нужную часть тела;
  • полостной – лекарство и один из электродов вводят в полость, а второй крепят на коже;
  • внутритканевой – эуфиллин принимают в виде таблеток или внутривенно, а электроды кладут на больной орган.

Также следует сказать, что возможно проведение «биполярного» электрофореза. Для этого используется два вещества разной полярности. Например: папаверин, никотиновая кислота.

Противопоказания к электрофорезу

При правильном исполнении процедуры побочные действия электрофореза с эуфиллином встречаются очень редко.

Побочные действия от назначения электрофореза с эуфиллином:

  • аллергические реакции;
  • гиперемия;
  • головная боль;
  • беспокойство;
  • бессонница;
  • тремор;
  • снижение давления;
  • учащенное сердцебиение.
  • повышенная температура тела;
  • воспалительные процессы на коже и в организме;
  • новообразования;
  • повышенное давление;
  • частое сердцебиение;
  • аритмия;
  • непереносимость тока;
  • аллергия на препарат;
  • раны или царапины на коже;
  • беременность;
  • психические заболевания;
  • недостаточность почек и печени;
  • месячные;
  • туберкулёз;
  • сердечная недостаточность;
  • кардиостимулятор в пациента;
  • плохая свертываемость крови.

Выводы

Несмотря на множество новых способов лечения различных заболеваний, электрофорез с эуфиллином назначают и по сей день. Процедура является доступной, безболезненной (особенно важно, если пациент — младенец). Манипуляция не приносит психологического и физического дискомфорта, а терапевтический эффект достаточно хороший.

Аминофиллин: Информация о лекарствах MedlinePlus

Храните это лекарство в упаковке, в которой оно было, плотно закрытой и недоступной для детей. Храните его при комнатной температуре, вдали от источников тепла и влаги (не в ванной).

Ненужные лекарства следует утилизировать особым образом, чтобы домашние животные, дети и другие люди не могли их употреблять. Однако вы не должны смывать это лекарство в унитаз. Вместо этого лучший способ избавиться от ваших лекарств - это воспользоваться программой возврата лекарств.Поговорите со своим фармацевтом или обратитесь в местный отдел утилизации мусора, чтобы узнать о программах возврата в вашем районе. Посетите веб-сайт FDA по безопасной утилизации лекарственных средств (http://goo.gl/c4Rm4p) для получения дополнительной информации, если у вас нет доступа к программе возврата.

Важно хранить все лекарства в недоступном для детей месте, так как многие контейнеры (например, еженедельные контейнеры для таблеток и контейнеры для глазных капель, кремов, пластырей и ингаляторов) не защищены от детей, и маленькие дети могут легко их открыть. .Чтобы защитить маленьких детей от отравления, всегда закрывайте защитные колпачки и немедленно кладите лекарство в безопасное место - то, которое находится вверху и подальше, вне их видимости и досягаемости. http://www.upandaway.org

.

Аминофиллин: показания, побочные эффекты, предупреждения

Общее название: Аминофиллин (я в OFF i lin)

Проверено с медицинской точки зрения Drugs.com. Последнее обновление: 8 мая 2020 г.

Использование аминофиллина:

  • Применяется для лечения проблем с дыханием.

Что мне нужно сказать своему врачу, ПРЕЖДЕ ЧЕМ я приму аминофиллин?

  • Если у вас аллергия на аминофиллин или любой другой компонент аминофиллина.
  • Если у вас аллергия на аминофиллин; любая часть аминофиллина; или любые другие лекарства, продукты питания или вещества. Расскажите своему врачу об аллергии и какие у вас были признаки.

Это лекарство может взаимодействовать с другими лекарствами или проблемами со здоровьем.

Расскажите своему врачу и фармацевту обо всех своих лекарствах (рецептурных или безрецептурных, натуральных продуктах, витаминах) и проблемах со здоровьем. Вы должны проверить чтобы убедиться, что вы можете принимать аминофиллин со всеми лекарствами и при проблемах со здоровьем.Не начинать, не останавливать и не изменять дозу любой препарат без консультации с врачом.

Что мне нужно знать или делать, пока я принимаю аминофиллин?

  • Сообщите всем своим поставщикам медицинских услуг, что вы принимаете аминофиллин. Сюда входят ваши врачи, медсестры, фармацевты и стоматологи.
  • Это лекарство может повлиять на некоторые лабораторные тесты. Сообщите всем своим поставщикам медицинских услуг и сотрудникам лабораторий, что вы принимаете аминофиллин.
  • Сдайте анализ крови в соответствии с указаниями врача. Поговорите с доктором.
  • Если у вас повышенный уровень сахара в крови (диабет), вам необходимо внимательно следить за уровнем сахара в крови.
  • Ограничьте употребление кофеина (например, чая, кофе, колы) и шоколада. Использование с аминофиллином может вызвать нервозность, дрожь и голодание. сердцебиение.
  • Проконсультируйтесь с врачом, прежде чем употреблять алкоголь.
  • Если вы начали или бросили курить табак или марихуану, поговорите со своим врачом.Может потребоваться изменить количество принимаемого вами препарата.
  • Если вы заболели, у вас поднялась температура или у вас хроническое заболевание, которое ухудшается, поговорите со своим врачом.
  • Сообщите своему врачу, если другой врач даст вам новое лекарство или скажет вам прекратить принимать лекарство, которое вы использовали.
  • Если вам 60 лет и старше, используйте аминофиллин с осторожностью. У вас может быть больше побочных эффектов.
  • С осторожностью применять у детей. Поговорите с доктором.
  • Сообщите своему врачу, если вы беременны, планируете беременность или кормите грудью. Вам нужно будет рассказать о преимуществах и рисках тебе и ребенку.

Как лучше всего принимать это лекарство (аминофиллин)?

Используйте аминофиллин по назначению врача. Прочтите всю предоставленную вам информацию. Строго следуйте всем инструкциям.

  • Его вводят в вену в течение определенного периода времени.

Что мне делать, если я пропустил дозу?

  • Позвоните своему врачу, чтобы узнать, что делать.

По поводу каких побочных эффектов мне нужно немедленно позвонить своему врачу?

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ / ВНИМАНИЕ: хотя это может быть редким явлением, у некоторых людей при приеме лекарства могут наблюдаться очень тяжелые, а иногда и смертельные побочные эффекты. Расскажите своим Если у вас есть какие-либо из следующих признаков или симптомов, которые могут быть связаны с очень серьезным побочным эффектом, немедленно обратитесь за медицинской помощью:

  • Признаки аллергической реакции в виде сыпи; крапивница; зуд; красная, опухшая, покрытая волдырями или шелушащаяся кожа с лихорадкой или без нее; хрипы; стеснение в груди или горле; затрудненное дыхание, глотание или разговор; необычная охриплость; или отек рта, лица, губ, языка, или горло.
  • Признаки низкого уровня калия, такие как мышечная боль или слабость, мышечные спазмы или ненормальное сердцебиение.
  • Признаки высокого уровня сахара в крови, такие как спутанность сознания, сонливость, усиление жажды, усиление голода, более частое мочеиспускание, приливы крови, учащенное дыхание или дыхание, пахнущее фруктами.
  • Мышечная боль или слабость.
  • Учащенное сердцебиение.
  • Необычное сердцебиение.
  • Учащенное дыхание.
  • Очень сильное головокружение или обморок.
  • Расстройство желудка или рвота.
  • Чувство раздражительности.
  • Чувство замешательства.
  • Изъятия.
  • Шаткость.

Какие еще побочные эффекты у аминофиллина?

Все препараты могут вызывать побочные эффекты. Однако у многих людей побочные эффекты отсутствуют или наблюдаются лишь незначительные побочные эффекты.Позвоните своему врачу или обратитесь за медицинской помощью поможет, если какие-либо из этих побочных эффектов или любые другие побочные эффекты беспокоят вас или не проходят:

  • Чувство нервозности и возбудимости.
  • Беспокойство.
  • Головная боль.
  • Проблемы со сном.
  • Боль в желудке или диарея.
  • Более частое мочеиспускание.

Это не все возможные побочные эффекты.Если у вас есть вопросы о побочных эффектах, позвоните своему врачу. Позвоните своему врачу за медицинской помощью совет о побочных эффектах.

Вы можете сообщить о побочных эффектах в FDA по телефону 1-800-332-1088. Вы также можете сообщить о побочных эффектах на https://www.fda.gov/medwatch.

Если есть подозрение на ПЕРЕДОЗИРОВКУ:

Если вы подозреваете, что произошла передозировка, немедленно позвоните в токсикологический центр или обратитесь за медицинской помощью. Будьте готовы рассказать или показать, что было взяли, сколько и когда это произошло.

Как хранить и / или выбрасывать аминофиллин?

  • Если вам необходимо хранить аминофиллин дома, поговорите со своим врачом, медсестрой или фармацевтом о том, как его хранить.

Использование информации для потребителей

  • Если ваши симптомы или проблемы со здоровьем не улучшаются или ухудшаются, позвоните своему врачу.
  • Не делитесь своими лекарствами с другими и не принимайте чужие лекарства.
  • Храните все лекарства в надежном месте.Храните все лекарства в недоступном для детей и домашних животных месте.
  • Выбросьте неиспользованные или просроченные лекарства. Не сливайте воду в унитазе или в канализацию, если вам не сказали об этом. Свяжитесь со своим фармацевт, если у вас есть вопросы о том, как лучше всего выбросить лекарства. В вашем районе могут быть программы возврата наркотиков.
  • Для некоторых лекарств могут быть указаны другие информационные буклеты для пациентов. Проконсультируйтесь с фармацевтом. Если у вас есть вопросы по аминофиллину, обращайтесь с вашим врачом, медсестрой, фармацевтом или другим поставщиком медицинских услуг.
  • Если вы считаете, что произошла передозировка, немедленно позвоните в токсикологический центр или обратитесь за медицинской помощью. Будьте готовы рассказать или показать, что было взяли, сколько и когда это произошло.

Дополнительная информация

Всегда консультируйтесь со своим врачом, чтобы убедиться, что информация, отображаемая на этой странице, применима к вашим личным обстоятельствам.

Заявление об отказе от ответственности за медицинское обслуживание

Подробнее об аминофиллине

Потребительские ресурсы

Другие бренды: Phyllocontin

Профессиональные ресурсы

Сопутствующие лечебные руководства

.

Аминофиллин (инъекции) Использование, побочные эффекты и предупреждения

Общее название: аминофиллин (инъекция) (мин ВЫКЛ и лин)
Фирменное наименование: Филлоконтин, Труфиллин

Медицинская проверка на Drugs.com 26 февраля 2019 г. - Автор Cerner Multum

Что такое аминофиллин?

Аминофиллин - это бронходилататор, который используется вместе с другими лекарствами для лечения внезапного ухудшения симптомов астмы, бронхита или эмфиземы.

Аминофиллин также может использоваться для целей, не указанных в данном руководстве.

Важная информация

В экстренной ситуации вы не сможете рассказать опекунам о своем состоянии здоровья. Убедитесь, что любой лечащий вас врач впоследствии знает, что вы принимали аминофиллин.

Перед приемом этого лекарства

Вы не должны лечиться этим лекарством, если у вас аллергия на аминофиллин или теофиллин.

Если возможно, перед приемом аминофиллина сообщите опекунам, если у вас недавно была лихорадка или у вас когда-либо была:

  • язва желудка;

  • изъятия;

  • проблемы с сердцем;

  • жидкость в легких;

  • заболевание щитовидной железы;

  • цирроз, гепатит или другие проблемы с печенью;

  • болезнь почек; или

  • - серьезная инфекция, называемая сепсисом.

Сообщите своему врачу, если вы курите или недавно бросили курить. Курение может повлиять на вашу дозу аминофиллина.

Неизвестно, вредит ли это лекарство нерожденному ребенку. Сообщите своему врачу, если вы беременны.

Аминофиллин может проникать в грудное молоко и вызывать беспокойство или другие побочные эффекты у грудного ребенка. Сообщите своему врачу, если вы кормите грудью.

В экстренной ситуации вы не сможете рассказать опекунам о своем состоянии здоровья.Убедитесь, что любой лечащий за вами врач впоследствии знает, что вы принимали это лекарство.

Как дается эуфиллин?

Аминофиллин вводится в вену в виде инфузии. Поставщик медицинских услуг сделает вам эту инъекцию.

Вам потребуются медицинские тесты, чтобы помочь врачу определить, как долго вам будет лечить аминофиллин.

Что произойдет, если я пропущу дозу?

Поскольку вы будете получать аминофиллин в клинических условиях, вы вряд ли пропустите прием.

Что произойдет, если я передозирую?

Поскольку аминофиллин назначается врачом в медицинских учреждениях, передозировка маловероятна.

Чего следует избегать при приеме аминофиллина?

Следуйте инструкциям врача о любых ограничениях в еде, напитках или занятиях.

Побочные эффекты аминофиллина

Получите неотложную медицинскую помощь при признаках аллергической реакции : крапивница; затрудненное дыхание; отек лица, губ, языка или горла.

Немедленно сообщите опекунам, если у вас есть:

  • рвота или сильная тошнота;

  • быстрых или нерегулярных ударов сердца;

  • изъятие;

  • высокий уровень сахара в крови - повышенная жажда, учащенное мочеиспускание, сухость во рту, запах изо рта; или

  • низкий уровень калия - судороги в ногах, запор, нерегулярное сердцебиение, трепетание в груди, онемение или покалывание, мышечная слабость или ощущение хромоты.

Серьезные побочные эффекты могут быть более вероятными у пожилых людей.

Общие побочные эффекты могут включать:

  • тошнота, рвота, диарея;

  • чувство беспокойства или раздражительности;

  • толчка;

  • учащенное мочеиспускание;

  • головная боль; или

  • нарушения сна (бессонница).

Это не полный список побочных эффектов, могут возникнуть и другие.Спросите у своего доктора о побочных эффектах. Вы можете сообщить о побочных эффектах в FDA по телефону 1-800-FDA-1088.

Какие другие препараты повлияют на аминофиллин?

Иногда небезопасно принимать определенные лекарства одновременно. Некоторые лекарства могут повлиять на уровень других лекарств, которые вы принимаете, в крови, что может усилить побочные эффекты или снизить эффективность лекарств.

Расскажите своему врачу обо всех ваших текущих лекарствах. Многие препараты могут влиять на аминофиллин, особенно:

Этот список не является полным, и многие другие препараты могут влиять на аминофиллин.Сюда входят лекарства, отпускаемые по рецепту и без рецепта, витамины и растительные продукты. Здесь перечислены не все возможные лекарственные взаимодействия.

Дополнительная информация

  • У вашего фармацевта есть дополнительная информация об аминофиллине, написанная для специалистов в области здравоохранения, которую вы можете прочитать.

Помните, храните это и все другие лекарства в недоступном для детей месте, никогда не передавайте свои лекарства другим и используйте это лекарство только по назначению.

Всегда консультируйтесь со своим врачом, чтобы убедиться, что информация, отображаемая на этой странице, применима к вашим личным обстоятельствам.

Авторские права 1996-2018 Cerner Multum, Inc. Версия: 4.01.

Заявление об ограничении ответственности в отношении медицинских услуг

Подробнее об аминофиллине

Потребительские ресурсы

Другие бренды: Phyllocontin

Профессиональные ресурсы

Сопутствующие лечебные руководства

.

Электрофоретический профиль изофермента лактатдегидрогеназы в сыворотке и тканях млекопитающих и птиц

1. Введение

Лактатдегидрогеназа (EC 1.1.1.27, LDH) представляет собой фермент, повсеместно распространенный в клетках живых систем. Он катализирует взаимное превращение лактата и пирувата с никотинамидадениндинуклеотидом (NAD + ) в качестве кофермента как в цитоплазме, так и в митохондриях [1, 2]. Этот фермент также присутствует в сыворотках крови животных и людей, где его измененный характер служит ценным дополнительным индикатором при диагностике заболеваний сердца, скелетных мышц и печени [3].В тканях позвоночных ЛДГ существует в нескольких электрофоретически различимых формах, известных как изоферменты. Они катализируют одну и ту же биохимическую реакцию, но отличаются друг от друга своими кинетическими характеристиками (K m , k cat ), физико-химическими свойствами (разный общий заряд), реакцией на ингибирование субстратом (пируват) [4, 5, 6 ] и иммунологический ответ. Несмотря на глубокое понимание LDH, отсутствовали данные об их относительном распределении и структуре в тканях и сыворотках птиц.Этот пробел в наших знаниях об этих ферментах, вероятно, был связан с тем фактом, что электрофоретические методы, обычно используемые для разделения изоферментов ЛДГ млекопитающих, не давали удовлетворительного разделения всех изоферментов птиц [7, 8]. Таким образом, их применение в исследованиях, а также в диагностической практике у птиц оставалось ограниченным определением общей активности ЛДГ без возможности правильной интерпретации данных в отношении их количественных характеристик в соответствующих тканях / органах.Целью нашей работы было разделить изоферменты лактатдегидрогеназы птичьего происхождения и охарактеризовать характер их относительного распределения в тканях и сыворотках с использованием подходящей электрофоретической техники.

2. Изоферменты лактатдегидрогеназы и их электрофоретическое разделение

ЛДГ - тетрамерный фермент, который существует в трех основных гомотетрамерных формах у позвоночных: H 4 (LDH 1 ), M 4 (LDH 5 ) и C 4 (LDH-X) [9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16].Три структурно различных полипептидных цепи гомотетрамерных молекул ЛДГ кодируются тремя разными генами [13, 17, 18, 19]. Формы лактатдегидрогеназы H 4 и M 4 , также называемые соматической ЛДГ [20], присутствуют в тканях всех исследованных позвоночных, тогда как тканевое распределение изофермента ЛДГ-C 4 варьируется от организма к организму. У млекопитающих и колумбидных птиц этот изофермент экспрессируется только в зрелых семенниках [19, 21, 22]. За исключением гомотетрамеров H 4 и M 4 , соматическая ЛДГ также существует в трех гибридных формах, таким образом, присутствуя в пяти структурных единицах в клетках большинства тканей.В соответствии с их различной подвижностью по отношению к аноду, соматические ЛДГ обозначаются как ЛДГ 1 (H 4 ), ЛДГ 2 (H 3 M), ЛДГ 3 (H 2 M 2 ). , LDH 4 (HM 3 ) и LDH 5 (M 4 ), при этом LDH 1 имеет самую высокую скорость миграции, а LDH 5 - самую низкую скорость миграции на анод. Три гибридные формы (LDH 2 , LDH 3 и LDH 4 ) относительно одинаково распределены между LDH 1 и LDH 5 на электрофореограмме.Протомеры соматических изоферментов ЛДГ, как правило, обозначают H (сердце) или B, и M (мышца) или A в зависимости от доминирования гомотетрамерных молекул в клетках соответствующих органов взрослых позвоночных. Гибридные формы ЛДГ присутствуют на различных уровнях в отдельных органах животного / человека.

Хотя они катализируют одну и ту же общую реакцию, изоферменты ЛДГ различаются по своим кинетическим характеристикам (K m , k cat ), как показано в Таблице 1 [4, 5, 6, 23, 24, 25].

10 −4
Курица Кролик Крупный рогатый скот
K м (моль.л −1 ) H 4 8.9 × 10 - 5 6,7 × 10 −5 7,1 × 10 −5
M 4 3,2 × 10 −3 3,5 × 10 −4
k cat (s −1 ) H 4 45000 41000 49400
M 4 9100003 не определено 80,200

Таблица 1.

Определены кинетические константы каталитического действия гомотетрамеров лактатдегидрогеназы H 4 и M 4 .

Как видно, гомотетрамеры H 4 имеют более низкое значение константы Михаэлиса K m для пирувата в качестве субстрата. Более того, H 4 более чувствителен к ингибированию высокой концентрацией пирувата, чем изофермент M 4 , который относительно безразличен к концентрации субстрата [3].

Различные структуры молекул изофермента лактатдегидрогеназы предопределяют их разный суммарный заряд и, как следствие, разную скорость миграции в электрическом поле.Известно, что заряд белка и, следовательно, его подвижность в электрическом поле зависят от pH окружающей его среды. Максимальное разрешение достигается, когда интересующие белки имеют сильно различающиеся электрические заряды. И наоборот, отсутствие или плохое разделение белков достигается, когда есть только небольшие различия в электрических зарядах молекул при заданных значениях pH. Изменение pH среды для электрофореза может изменить заряды соответствующих белков, что приведет к лучшему разделению.Обычно для разделения пяти изоферментов лактатдегидрогеназы выбирают буферную систему с pH 8,6. При pH 8,6 их электрофоретическая миграция зависит от двух чистых типов, то есть от форм H 4 и M 4 [9]. Чем шире два гомотетрамера различаются по заряду (в случае лактатдегидрогеназ млекопитающих), тем более различимы гибриды с помощью электрофореза. В случае лактатдегидрогеназ птиц эти два чистых типа мигрируют относительно близко друг к другу к отрицательному полюсу при pH 8.6, и наблюдение гибридных форм в этих условиях очень затруднительно [9]. Чтобы преодолеть эту трудность, мы выбрали градиент pH 3–9 для электрофоретического разделения изоферментов лактатдегидрогеназы птицы (метод изоэлектрической фокусировки, IEF) [8]. С помощью этого метода мы достигли хорошего и четкого разрешения всех пяти форм фермента в сыворотке и тканях курицы (взрослой и эмбриональной), индейки, фазана и голубя. Мы также сравнили образцы тканей и сывороток птиц с образцами, полученными от млекопитающих.

3. Подготовка образцов для электрофореза.

Сыворотки различных видов животных получали от отдохнувших и клинически здоровых животных. Сбор крови для образцов сыворотки выполнялся стандартными процедурами, гемолизированная сыворотка не использовалась для исследования. Определение общей активности лактатдегидрогеназы, а также разделение изоферментов проводили в тот же день, что и сбор крови.

Образцы тканей были взяты у птиц после обезглавливания и немедленно помещены в ледяной буферный солевой раствор.Ткани разрезали на мелкие кусочки и промывали забуференным физиологическим раствором для удаления избытка крови и соединительной ткани. Два грамма ткани гомогенизировали в 10 объемах холодного буфера (0,05 моль / л буфера Tris-HCl, pH 7,3 с 0,01% EDTA). Гомогенат центрифугировали при 19000 × g в течение 60 мин при 4 ° C, и супернатант использовали для анализа ферментов и электрофоретического разделения.

Кровь на эритроциты по образцу ЛДГ собирали в пробирки, содержащие гепарин натрия, и центрифугировали при 450 × g в течение 10 мин при 4 ° C.Плазму удаляли, эритроциты тщательно промывали трижды в двойном объеме, а супернатант удаляли. Затем клетки лизировали добавлением трех объемов холодной дистиллированной воды и центрифугировали при 19000 × g в течение 60 мин при 4 ° C.

Куриные эмбриональные органы / ткани были взяты из 9-дневного куриного эмбриона (n = 6), промыты в буферном солевом растворе и гомогенизированы в 50 мМ трис-HCl, pH 7,5, с содержанием 0,01% EDTA с использованием Precellys 24 —Двойной гомогенизатор (Bertin Technologies, Франция).Гомогенаты центрифугировали при 25000 × g в течение 30 мин при 4 ° C, и супернатанты служили источником фермента.

Каталитическую активность ЛДГ определяли колориметрически при 37 ° C с использованием лактата в качестве субстрата с NAD + в качестве кофермента и коричневато-красного гидразона пирувата в качестве измеряемого продукта (A 505 ). Концентрацию белка для расчета удельной активности фермента (Ед / г) определяли по методу Брэдфорда [26]. Активность ЛДГ в эритроцитах выражали в единицах фермента на грамм гемоглобина (Ед / г гемоглобина).

4. Электрофоретические методы, используемые для разделения изоферментов ЛДГ

Изоферменты лактатдегидрогеназы можно разделить с использованием различных поддерживающих сред, таких как крахмал, агароза, ацетат целлюлозы и полиакриламидный гель. Разделение следует проводить при охлаждении до 4 ° C, чтобы предотвратить возможность инактивации ферментов, особенно термочувствительных медленно движущихся изоферментов (LDH 4 и LDH 5 ) [3].

Два типа электрофореза в полиакриламидном геле для разделения изоферментов лактатдегидрогеназы млекопитающих и птиц были использованы в нашей лаборатории (PhastSystem, Pharmacia LKB, Швеция):

  1. Электрофорез в градиентном полиакриламидном геле с непрерывным градиентом геля 10–15%. зона и 2% -ное сшивание (СТРАНИЦА 10-15), а также зона непрерывного градиента геля 8-25% (СТРАНИЦА 8-25).Условия разделения: 400 В, 10,0 мА, время разделения 45 мин при 4 ° C и с буферной системой 0,88 моль / л 1-аланин / 0,25 моль / л Трис, pH 8,8.

  2. Метод изоэлектрической фокусировки с диапазоном pH 3–9 в гомогенном 5% полиакриламидном геле, содержащем амфолиты-носители Pharmalyte (IEF 3–9). Условия разделения: 2000 В, 2,5 мА, 15 ° C, время разделения 20 мин.

5. Обнаружение и количественное определение изоферментов лактатдегидрогеназы

Поскольку многие белки были разделены электрофорезом, изоферменты лактатдегидрогеназы были обнаружены (окрашены), в частности, с использованием колориметрического метода с системой анализа в 0.1 M Gly-NaCl-NaOH, pH 8,3: 1,0 моль / л лактата натрия (1,0 мл), 10 мг / мл NAD + (1,5 мл), 1,0 мг / мл нитросинего тетразолия (NBT) (6,0 мл), и от 2,0 мг / мл метосульфата феназина (PSM) (0,6 мл) до 30 мл с 0,1 М Gly-NaCl-NaOH, pH 8,3. В этой реакционной смеси гели инкубировали при 37 ° C в течение 20–30 мин. Затем их погружали в 7,5% (об. / Об.) Уксусную кислоту, чтобы остановить реакцию. Для выявления зон изофермента лактатдегидрогеназы на электрофореограмме мы избегаем использования буфера Tris-HCl, так как он создает достаточно интенсивный фон на геле.Система PhastImage (Pharmacia LKB, Швеция) служила для денситометрического сканирования (613 нм) рисунка, а для определения относительного распределения (%) фракций изоферментов использовалась GEL LOGIC 100 IMAGING SYSTEM с программным обеспечением Kodak 1D Image Analysis Software (Япония). также используется. Чтобы идентифицировать отдельные изоферменты ЛДГ птиц на электрофореограмме, был применен принцип, обычно используемый для идентификации изоферментов ЛДГ млекопитающих: фракция, ближайшая к аноду, обозначена как LDH 1 , а самая близкая к катоду - LDH 5 .

6. Структуры изоферментов ЛДГ и их интерпретация

Четыре-пять изоферментов ЛДГ обычно присутствуют в нормальных сыворотках животных и людей в результате естественной деградации клеток различных тканей / органов. Их количественное распределение в сыворотке крови различно и относительно характерно для конкретного биологического вида (рис. 1) [8]. После разделения в градиенте концентрации полиакриламида (10–15%) и pH 8,8 лактатдегидрогеназы млекопитающих разделялись с хорошим разрешением, тогда как сыворотка птицы (курица) давала только одну, несколько диффузную ферментативную зону [8].

Рис. 1.

Структура изоферментов лактатдегидрогеназы в сыворотке крови некоторых птиц и млекопитающих.

Хорошее и четкое разделение изоферментов LDH птиц (курица и фазан) со всеми пятью изоферментными зонами было достигнуто с использованием техники изоэлектрического фокусирования в диапазоне pH 3–9 [8]. Похожая картина была также вызвана изоферментами индейки [27]. Сравнение каталитической активности ЛДГ и относительного распределения (%) его изоферментов в сыворотке исследуемых животных (рис.1) показало, что преобладающая часть активности ЛДГ в куриной сыворотке сосредоточена в мышечной форме фермента (ЛДГ 5 ) (66%), затем следует LDH 4 (23%).От LDH 1 до LDH 3 присутствовали в небольших количествах с примерно одинаковыми пропорциями (3–6%). Мышечный изофермент также был основной фракцией в сыворотке фазана и индейки [8, 27] (44 и 50% соответственно). Сердечный гомотетрамер, а также гибридные формы присутствовали в меньших количествах. У большинства млекопитающих наблюдалась обратная картина: основная часть активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови мигрировала в первых трех анодных фракциях, в то время как LDH 4 и LDH 5 вносили лишь незначительный вклад (Рисунок 1).Образец сыворотки изоферментов ЛДГ, вероятно, отражает характер основных доноров органов ЛДГ (сердце, скелетные мышцы и печень) и отличается от животного к виду животного. В качестве примера количественного анализа может служить структура органов / тканей и относительное распределение изоферментов ЛДГ у кур (рис. 2) [28]. Паттерны изоферментов лактатдегидрогеназы в различных тканях, эритроцитах и ​​сыворотке цыплят можно разделить на три группы: (1) изоферменты с катодным доминированием, (2) изоферменты с анодным доминированием и (3) те, которые распределены по всей электрофореограмме.Анодное доминирование (LDH 1 ) наблюдается в сердечной мышце и эритроцитах, в то время как катодное доминирование (LDH 5 ) наблюдается в грудной мышце. Другие ткани и сыворотка демонстрируют более распространенный образец с некоторой анодной тенденцией (почки, печень), катодной тенденцией (скелетные мышцы, сыворотка) и более равномерным распределением (селезенка, поджелудочная железа, легкие и мозг). Сходное распределение и характер изоферментов ЛДГ были описаны у индейки [27].

Рисунок 2.

Структура изоферментов лактатдегидрогеназы в тканях и крови цыплят.

Сравнение изоферментов птиц (курица, индейка) [27, 28], человека и других млекопитающих выявляет некоторые различия. Хотя структура сердца и скелетных мышц у птиц и млекопитающих схожа, в других тканях, особенно в печени, она отличается. В то время как у большинства млекопитающих в структуре печени количественно преобладают медленные катодные изоферменты, подобные скелетным мышцам (LDH 4 , LDH 5 ; кролик, лошадь, ягненок, собака, человек) [29], у кур и индейки. картина противоположная, с преобладанием анодных изоферментов, аналогичных изоферменту аэробной сердечной мышцы [27, 28].Причина этих различий не ясна, но это может свидетельствовать о том, что внутренние органы птиц лучше приспособлены для работы в условиях аэробного метаболизма.

Помимо изоферментов ЛДГ в сыворотке и тканях взрослых птиц, нам также удалось отделить лактатдегидрогеназы, происходящие из выбранных тканей куриного эмбриона, с использованием техники IEF в диапазоне pH 3–9 (Таблица 2).

Ткань Лактатдегидрогеназа (%)
1 2 3 4 5
Скелетные мышцы 21 21 20 20
Сердце 12 21 23 21 18

Таблица 2.

Относительное распределение (%) изоферментов лактатдегидрогеназы в скелетных мышцах и сердце куриного эмбриона (n = 6).

Интересный образец был обнаружен в мышцах куриного эмбриона, где присутствовали все пять изоформ (таблица 2), тогда как в тканях взрослых животных был обнаружен только один изофермент LDH 5 (рисунок 2). Это различие может быть связано с изменениями в развитии изоферментов ЛДГ, аналогичными лактатдегидрогеназам эмбриона сердца курицы. Они также были относительно равномерно распределены на электрофореограмме, давая картину, отличную от структуры сердца взрослого цыпленка, где анодная изоформа LDH 1 преобладает над катодными, которые либо отсутствуют, либо присутствуют только в следовых количествах.

7. Заключение

Подходящим методом электрофоретического разделения изоферментов лактатдегидрогеназы птицы является метод изоэлектрического фокусирования в диапазоне pH 3–9. Это позволило определить закономерности и относительное распределение (%) изоформ ЛДГ в сыворотке и тканях птиц (взрослых и эмбриональных цыплят, а также индейки). Они характеризовались преобладанием медленно движущихся ЛДГ 5 в сыворотках обоих видов, вероятно, происходящих из грудных мышц, что отличает их от структуры млекопитающих, где анодная ЛДГ 1 -ЛДГ 3 преобладает над катодной формой / ами.Структура изоферментов лактатдегидрогеназы в тканях млекопитающих отличается от вида к виду с наибольшей ферментативной активностью в скелетных мышцах, за которыми следуют сердце и печень. Лактатдегидрогеназы взрослого цыпленка и эмбриональные лактатдегидрогеназы отличаются друг от друга, особенно по структуре грудной мышцы, где все пять изоферментов присутствуют в тканях эмбрионального происхождения.

Благодарности

Работа поддержана исследовательским грантом Агентства научных грантов VEGA № 1/0046/16.

Конфликт интересов

Авторы заявили об отсутствии конфликта интересов.

.

Смотрите также